Fluorescence microscopy: هن طريقي جا اصول

جذب ۽ نور وڌيڪ inorganic ۽ حياتياتي fluids جي ٻيهر emission phosphorescence يا fluorescence جو نتيجو آهي. جي ڌڪيندا جي وچ ۾ فرق جذب ۽ نور flux جي emission جي وچ ۾ interval جو مدو آهي. جڏهن اهي عمل جي fluorescence لڳ ڀڳ جهازن نمودار، جڏهن ته phosphorescence - ڪجهه دير سان.

تاريخي معلومات

1852 ع ۾، انگريز سائنسدان Stokes، پهرين fluorescence بيان. هن سان گڏ ان جي تجربن جي نتيجي ۾ هڪ نئين اصطلاح متعارف fluorspar، جنهن ultraviolet روشني هيٺ سرخ روشني وجھندا آھيو. Stokes هڪ دلچسپ سڄو ڌيان ڇڪايو. اهو مليو آهي ته fluorescent تاب جي wavelength هميشه جي excitation روشني جي وهڪري جي ڀيٽ ۾ تمام وڏو آھي.

جي 19th صدي عيسويء ۾ hypothesis تصديق ڪرڻ لاء اتي ڪيترن ئي تجربن ٿي وئي آهي. اهي پهتا ته نموني جو هڪ قسم ultraviolet روشني جي اثر هيٺ fluoresce. هن مواد مان، ٻين شين مان، crystals، resins، افروز، chlorophyll، اڻ واضح رهي ته، inorganic مرڪب، vitamins، oils ٿي. حياتياتي تجربن لاء dyes جي سڌو استعمال صرف 1930 ع ۾ شروع ڪيو،

Fluorescence microscopy: بيان

جي 20th صديء جي پڙهائي جي پهرين اڌ ۾ استعمال جي مواد جي ڪجهه اعلي specificity رويا. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. جي ڪارڪردگي آهي، جنهن جي متضاد طريقن جي حاصل نه ٿي سگهي ڪرڻ جي مهرباني، fluorescence microscopy جو طريقو biomedical ۽ حياتياتي تحقيق ۾ هڪ ضروري اوزار بڻجي چڪو آهي. ڪتب اهم نتيجا حاصل ڪري، ۽ مواد جي لاء ويا.

? fluorescence microscopy جو طريقو ڇا فائدن ڪندو؟ نئين مواد استعمال ڪرڻ جي لحاظ کان ۽ انتهائي مخصوص سيل submicroscopic جزا جي چونڊ بڻجي ويو آهي. Fluorescence microscopy واحد انو لڳائڻ ڪري سگهو ٿا. dyes جو هڪ قسم جو فوري طور تي وڌيڪ شيون جي سڃاڻپ جي اجازت ڏئي. جي سامان جي diffraction حد جي محدود spatial قرارداد، جنهن کي، موڙ ۾، نموني جي مخصوص مال تي دارومدار باوجود، هن جي سطح هيٺان انو جي سڃاڻپ به ڪافي ممڪن آهي. پوء اشراق تائين exhibit autofluorescence کان پوء مختلف نمونا. هي سڄو وڏي پيماني تي petrology، botany، جي semiconductor صنعت ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي.

مضمونن جي

جانور ثي يا pathogens اڪثر پيچيدو يا تمام ڪمزور يا تمام مضبوط unspecific autofluorescence جو اڀياس. تنهن هوندي به، پڙهائي ۾ قدر جي مادي جزا هڪ مخصوص wavelength تي جوش ۾ تعارف حاصل ۽ ضروري نور وهڪري جي شدت ڪرڻباري. Fluorochromes آزادي جوڙجڪ (ڏينم يا لڪل) انسيت جي قابل dyes طور تي ڪم. اھڙي طرح انھن کي ٽارگيٽ ڪرڻ لاء هڪ اعلي selectivity، ۽ quantum بھ آهن.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluorescence microscopy وڏي پيماني تي قدرتي ۽ synthetic dyes جي advent کان استعمال ڪيو ويو آهي. چيائون ته emission ۽ excitation جي ڪجهه شدت پروفائيل مالڪ ۽ مخصوص حياتياتي هدف کي نشانو بڻايو.

فرد انو جي سڃاڻپ

اڪثر، موزون حالتن ۾، توهان کي هڪ الڳ عنصر ڄمندو رجسٽر ڪري سگهو ٿا. هن جي لاء، ٻين شين مان، اهو ضروري آهي ته detector ۽ نظريي جي پس منظر جي هڪ ڪجيٿو گهٽ شور مهيا ڪرڻ آهي. سبب 300 هزار تائين مني وجھندا آھيو ڪري سگهو ٿا photobleaching کي ناڪامي کي Fluorescein آنو. Photons. عمل جو 20 سيڪڙو گڏ ڪرڻ ڪارڪردگيء تي ۽ انھن جي باري ۾ 60 هزار جي رقم ۾ رجسٽر ڪري سگهو ٿا.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. avalanche photodiodes يا اليڪٽرانڪ ضرب جي بنياد تي Fluorescence microscopy، جي تحقيق جو ٻيو ذريعي فرد انو جي رويي جو مشاهدو ڪرڻ جي اجازت ڏني، ۽ ڪن حالتن ۾ به منٽن.

پيچيدگي

نظريي کي زور شور سان پس منظر جي دمن جي حق ۾ هڪ اهم مسئلو آهي. حقيقت اها آهي ته فلٽر ۽ شيشن جي جوڙجڪ ۾ استعمال جي مواد جي ڪيترن ئي ڪجهه autofluorescence exhibit جي ڪري، سنڌ جي اوائلي مرحلن ۾ سائنسدانن جي ڪوششن سان هڪ گهٽ fluorescence گذارڻ جزا جي پيداوار لاء ايجنڊا هئا. تنهن هوندي به، پوء تجربن نئين conclusions ڏي روانا ٿيا. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. خاص طور تي، ان کي ته fluorescence microscopy مليو هو، ڪل اندروني سوچ تي ٻڌل آهي، ان جي هڪ گهٽ پس منظر ۽ اعلي شدت excitation روشني حاصل ڪرڻ جي اجازت ڏئي ٿو.

جيالا

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. fluorescence microscopy جي اصولن، ڪل اندروني سوچ جي بنياد تي evanescent لهر يا evanescent جو استعمال آهي. ان کي مختلف سان ميڊيا جي وچ ۾ چوڪي تي وٺندي refractive-ڏساڪ. هن معاملي ۾، نور شعاع جي prism ذريعي گذري ٿو. اهو هڪ اعلي refractive انڊيڪس سميجي ڪئي.

هن prism گهٽ سميجي سان aqueous حل يا شيشي جي ڀرسان. روشني جي هڪ شعاع هڪ موڙ آهي ته وڌيڪ نازڪ آهي ته ان تي هدايت ڪئي ته، سنڌ جي شعاع بالڪل جي ڏيکاء کان ڌيان آهي. هي سڄو، موڙ ۾، موج nonpropagating ماري. ٻين لفظن ۾، جي ٺاهيل electromagnetic جي ميدان ۾ جنهن هڪ فاصلو 200 nanometers کان گهٽ ڪري هڪ هيٺين refractive انڊيڪس سميجي سان هڪ وچولي ۾ گھڙندو آھي.

هن evanescent لهر جي روشني جي شدت fluorophores ڪري ڪافي ٿئي ها. تنهن هوندي به، ان جي صفا ننڍي کوٽائي سبب، ان جي مقدار تمام ننڍڙو ٿيندو. جنهن جي نتيجي ۾ هڪ گهٽ-سطح پس منظر آهي.

ترميمي

Fluorescence microscopy ڪل اندروني سوچ تي ٻڌل آهي، اد-illumination سان عمل ڪري سگهجي ٿو. هن اعلي عددي aperture (گهٽ ۾ گهٽ 1،4، پر اهو موزون آهي ته ان 1.45-1.6 پهچي)، ۽ جزوي منور ميدان مشڪن سان شيشن جي ضرورت آهي. جنهنڪري هڪ ننڍڙي جاء ماپ سان حاصل آهي. هڪ پتلي کي رنگ، جنهن جو وهڪرو جو هڪ حصو جي پروفائيل تي استعمال ڪري وڏو يڪروپائي لاء. جي نازڪ موڙ، جنهن کان پوء اتان هڪ ڪل پرتو آهي طور، اسان جي لينس ۾ immersion وچولي ۽ خوردبيني جي ڪپڙا شيشي جي refraction جي هڪ اعلي سطحي جي ضرورت آهي.